產(chǎn)品類別：脾臟白細胞的分離
 
產(chǎn)品編號：WBC1085PK
 
產(chǎn)品名稱：豚鼠脾臟白細胞分離液試劑盒
 
產(chǎn)品規(guī)格：200ml/KIT
 
產(chǎn)品價格：￥650.00元
 
本品用于分離豚鼠脾臟白細胞






 
 
“XXXX”動物脾臟組織白細胞分離液實驗方法
 
 
技術(shù)文檔編號：TBD0033SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
A	XXXX 動物脾臟組織白細胞分離液		200ml
B	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml
C	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
D	F 液（贈品）	F2013TBD	200ml
E	紅細胞裂解液（贈品）	NH4CL2009	100ml
F	說明書		1 份

 
【實驗前準備】
 
適用儀器：最大可提供 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
 

• 首先制備脾臟組織單細胞懸液，制備方法詳見“脾臟組織單細胞懸液制備技術(shù)”。

 

• 取一支 15ml 離心管，加入與脾臟組織單細胞懸液等量的分離液（注：分離液最少不得少于 3ml）。

 

• 用吸管小心吸取脾臟組織單細胞懸液加于分離液液面上，500-800g，離心 20-30min。（注：根據(jù)脾臟組織單細胞懸液樣本量確定離心條件，脾臟組織單細胞懸液量越大，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果）。

 

• 離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細胞層（一層或兩層），加入 10 ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細胞。250g，離心 10min。重復洗滌 2-3 次，即得所需白細胞。

 

• 如有紅細胞殘留請使用紅細胞裂解液（產(chǎn)品編號：NH4CL2009）裂解紅細胞，具體操作方法詳見“紅細胞裂解液使用說明”。

 
【注意事項】

• 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結(jié)果，最好在取樣 2h 內(nèi)進行實驗，樣品存放時間越長，細胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。

 

• 本實驗最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。

 

• 分離液用量大于脾臟組織單細胞懸液樣本量時，分離效果更佳。

 

• 如實驗后細胞得率或活性過低，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助，。

 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
 
【參考值（參考范圍）】
 
本實驗白細胞提取率及純度大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當進行參考。
 

		紅細胞			白細胞		血小板
				（4.0-10.0）×109
含量（個/L）		（4.0-5.5）×1012		中性粒細胞	淋巴細胞	單核細胞	（1.0-3.0）×1011
				50%-70%	20%-40%	3%-8%
【相關(guān)實驗技術(shù)方案】
1.	脾臟組織單細胞懸液制備技術(shù)。
2.	所獲得白細胞的培養(yǎng)技術(shù)。
3.	所獲得白細胞的核酸提取技術(shù)。
4.	所獲得白細胞的鑒定方法
	A.流式細胞技術(shù)
	B.免疫組化技術(shù)

 
C.原位雜交技術(shù)
 
D.PCR 技術(shù)
 
 

	【可能存在的問題及解決方法】
	1.   由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
	出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案
	離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短	適當增減轉(zhuǎn)速
	離心后目的細胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
	離心后白環(huán)層彌散	細胞密度過大	調(diào)整細胞密度
	離心后白環(huán)層太淺或看不見	細胞密度過小

 

• 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時，恒定離心時間，對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。

 

• 本分離液依照國際標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可

 
能出現(xiàn)紅細胞沉降不完全的情況，可以適當加大離心轉(zhuǎn)速。
 
注：在對離心條件進行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達到最佳分離效果，
 
離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。