細(xì)菌蛋白抽提試劑盒
 
目錄號(hào)：YJ0888S（25 preps）
YJ0888M（100 preps）
 
保存條件：Lysozyme、DNaseⅠ、Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它組分：室溫
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 

Component	YJ0888S	YJ0888M
	25 preps	100 preps
Bacterial Protein Extraction Reagent	25 ml	100 ml
Protease Inhibitor Cocktail	250 μl	1 ml
Lysozyme （50 mg/ml）	50 μl	200 μl
DNaseⅠ（1,000 U/ml）	25 μl	100 μl

 
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
 
細(xì)菌蛋白抽提試劑使用溫和的非離子型去污劑，適用于大腸桿菌及昆蟲細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白提取。提取過(guò)程中不需進(jìn)行超聲破碎，有效避免了外源蛋白的污染。本產(chǎn)品可應(yīng)用于從細(xì)菌裂解液中提取可溶性蛋白。細(xì)菌蛋白抽提試劑盒在抽提試劑的基礎(chǔ)上添加了溶菌酶、DNaseⅠ和蛋白酶抑制劑混合物，可提高蛋白提取效率并減輕因DNA引起的粘稠現(xiàn)象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物學(xué)活性，可進(jìn)行IP、Western blot、蛋白純化等下游操作。
 
注意事項(xiàng)
 
1．本產(chǎn)品適用于從新鮮或凍存細(xì)菌和昆蟲細(xì)胞中提取蛋白。
 
2．本品采用Tris緩沖系統(tǒng)，蛋白提取后的純化操作，請(qǐng)使用相同的緩沖系統(tǒng)。
 
3．使用本產(chǎn)品獲得的蛋白裂解液，可用BCA或Bradford法進(jìn)行蛋白定量。
 
4．對(duì)于特殊的菌株，如果抽提效果不理想，可在抽提蛋白前冰凍樣品。
 
5．根據(jù)具體情況，可在本產(chǎn)品中加入蛋白酶抑制劑、鹽、螯合劑、還原劑等。

操作步驟
 
● 昆蟲細(xì)胞蛋白提取
 
1．低速離心收集細(xì)胞。每1 ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入10 μl Protease Inhibitor Cocktail即為1×工作液。
2．稱量細(xì)胞濕重，按10 ml/g的量加入1×工作液。
 
3．重懸后，冰上孵育20分鐘（冰上放置時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型不同進(jìn)行調(diào)整）。
 
4．15,000×g離心15分鐘，分離可溶性蛋白。
 
● 細(xì)菌可溶性蛋白提取
 
1．5,000×g離心10分鐘，收集菌體。
 
2．可選步驟：每1 ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入1 μl DNase I（1,000 U/ml）、 2 μl Lysozyme（50 mg/ml）和10 μl Protease Inhibitor Cocktail，渦旋震蕩混勻。
3．按照每克菌體沉淀加入20 ml Bacterial Protein Extraction Reagent的比例，向菌體沉
 
淀中加入抽提液，充分渦旋或用移液器上下吹打直至菌體完全重懸。
 
4．重懸后，室溫孵育10-15分鐘（放置時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型不同進(jìn)行調(diào)整）。
 
5．15,000×g離心5分鐘。
 
6．轉(zhuǎn)移上清至新的離心管中（上清中即為可溶性蛋白），進(jìn)行蛋白定量及下游實(shí)驗(yàn)。
 
注意：如目的蛋白以包涵體形式存在，可使用包涵體蛋白溶解液（CW0007）進(jìn)行溶解或優(yōu)化表達(dá)
 
條件增加可溶性蛋白的表達(dá)。
 
常見(jiàn)問(wèn)題
 

問(wèn)題	可能原因	解決方法
目的蛋白不溶	目的蛋白表達(dá)為包涵體	優(yōu)化表達(dá)條件或使用包涵體蛋白溶解液
		在蛋白抽提試劑中加入 Lysozyme 和 DNase I
加入Lysozyme 后目的蛋白	溫度過(guò)低	將使用試劑恢復(fù)至室溫
仍沒(méi)有提取出來(lái)	Lysozyme 活性降低或失活	加入更多的 Lysozyme 或更換新的酶
提取物粘度高	DNase I 活性降低或失活	加入更多的 DNase I 或更換新的 DNase I
		將鎂離子的終濃度增加至 2 mM
蛋白抽提后仍有大部分蛋	蛋白量過(guò)大	加入 Lysozyme 及 DNase I
白存在于沉淀中
蛋白抽提試劑有沉底析出	溫度過(guò)低	將蛋白抽提試劑恢復(fù)至室溫